关于标签抗体和内参抗体

在生物技术中，人们常利用DNA重组技术构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白，即标签融合蛋白，再利用能特异性识别该标签的抗体对其进行鉴定与纯化。整个反应的原理是基于抗原-抗体反应，标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。融合标签可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。常用的标签包括Flag、His、myc、HA、GST、GFP等。标签抗体可用于检测或纯化表达载体上的标签序列，从而研究目标蛋白的表达水平与功能。标签抗体现在已经成为基因表达，基因功能信号转导等研究中的常用工具。
 

在Western Blot实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参含量来进行校正。内部参照即选取相同样本中某个内源表达的蛋白作为参照。通常会选择由管家基因编码的蛋白(Housekeeping Proteins)作为内参，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化可以作为一个稳定的参照物(比如GAPDH、β-Actin等)。在WB实验中，蛋白的表达情况是通过与抗体的结合而体现的，也就是说内参蛋白的选择问题等同于内参抗体的选择问题。